簡(jiǎn)介

基因的功能性缺失，是尋找與表型相關(guān)特定基因靶點(diǎn)的重要方法。CRISPR/Cas9可以通過(guò)特定的sgRNA高特異性地靶向目的DNA序列，造成指定位點(diǎn)的DNA雙鏈斷裂，從而引入Indel（Shortinsert/deletion）突變，導(dǎo)致目的基因的功能完全缺失。近年來(lái)對(duì)CRISPR/Cas9系統(tǒng)的優(yōu)化和改進(jìn)，使得基因敲除的效率和特異性進(jìn)一步提高，在某些領(lǐng)域已經(jīng)逐步取代傳統(tǒng)的RNAi技術(shù)。

公司在最新的CRISPR/Cas9技術(shù)基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了一套Quick-KO系統(tǒng)，能夠高效、快速并且低成本地實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的基因敲除，針對(duì)幾十到幾百個(gè)目的潛在靶點(diǎn)基因進(jìn)行篩選，能夠在2~3個(gè)月內(nèi)完成批量的單基因敲除細(xì)胞株的構(gòu)建，較全基因組文庫(kù)篩選，可有效縮小范圍，提高研究效率。

方法

客戶提供潛在靶點(diǎn)基因清單，派致根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)sgRNA，通過(guò)Quick-KO平臺(tái)進(jìn)行基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建，在敲除株的基礎(chǔ)上進(jìn)行功能篩選，通過(guò)抗性分析或者marker基因報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行篩選結(jié)果的分析。

　　步驟

1. 明確篩選細(xì)胞和靶點(diǎn)清單

2. 設(shè)計(jì)sgRNA

3. 對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)（支原體檢測(cè)，單克隆形成率檢測(cè)，轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)）

4. Quick-KO系統(tǒng)進(jìn)行單克隆敲除株構(gòu)建

5. 藥物篩選

6. 細(xì)胞活性分析

7. 撰寫(xiě)基因篩選報(bào)告

　　后續(xù)可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

1. 針對(duì)篩選的基因敲除細(xì)胞株進(jìn)行裸鼠成瘤（CDX）模型建立

2. CDX小鼠目的藥物的治療

3. 檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)狀況，在體評(píng)估篩選到的目的基因。