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當前位置
UMI-RNAseq
產品介紹: UMI (Unique molecularidentifier)——特異性分子標簽(UMI)為 8-10nt 的短序列,可看做“條形碼”,在文庫構建時通過連接接頭引入UMI標簽連接到cDNA分子中,標記原始樣品中的每個分子,對同一來源擴增產物進行追蹤和最終提取分組,用于排除 PCR 擴增偏好性和測序偏好性引入的定量偏差,便于獲得足夠的讀數以進行分析。 UMI-RNA-seq技術是利用高通量測序技術在文庫構建時引入特異性分子標簽UMI,全面快速地獲取某一物種特定器官或組織在某一狀態下的幾乎所有轉錄本,實現精準定量,更準確識別SNP位點(Single Nucleotide Polymorphisms),準確定量低豐度轉錄本,提供全面的轉錄組信息。 可開展真核有參轉錄組,真核無參轉錄組及原核轉錄組等方向研究,全面助力基因表達水平研究。 原理及優勢:
基因表達定量更準確 UMI技術無需跟蹤拷貝數,可達到區分來自單個分子冗余的PCR重復序列,減少重復定量,屏蔽PCR偏好性,矯正測序錯誤,以達到絕對定量; 低豐度轉錄本準確定量 相同UMI標記的reads可進行相互矯正,對于測定的reads均會保留,而不會被當作背景噪音剔除,相比常規建庫方式得到的有效數據量增多,可將部分低豐度轉錄本準確鑒定到; 獲得的位點突變SNP更為準確 UMI技術降低了文庫構建過程中的擴增及測序錯誤引入的假陽性,在進行SNP、 Indel的分析中獲得的信息更為準確; 差異基因與qPCR驗證一致性更高 通過UMI技術可實現精準定量,進而對于差異基因進行qPCR驗證結果的一致性要明顯高于普通轉錄組; 起始量低 對于UMI技術的建庫起始RNA量低至200ng; 技術流程及送樣要求: 參見轉錄組測序流程及要求 |