血清、尿液代謝組學樣本收集參考步驟

1. 血清

樣品量要求：

NMR 實驗500ul/sample；GC-MS，LC-MS 實驗200ul/sample；一定避免反復凍融。

樣本收集步驟：

血液收集在離心管中靜置 30 分鐘進行凝固分層。然后低速離心取上清裝載干凈的離心管中，

再高速離心5 分鐘，取上清分裝到凍存管中，每管0.5ml，-80 度凍存寄送。

注意事項：

1）取血時如用酒精消毒，請擦干擦拭部位，待酒精完全揮發(fā)后再取樣。

2）取血時如用麻醉劑，建議用異氟醚，防止在 NMR 血清譜圖中出現(xiàn)干擾峰。

3）如要采用血漿，請務必使用肝素鈉抗凝管。

2. 尿液

樣本量要求：

1ml/例，原則上可以多取一點。

樣本收集步驟：

晨起中段尿（臨床）或晨間 1 小時尿（動物）直接分裝到離心管中，每管1ml，

添加一滴（約 10ul）質(zhì)量體積為1/100（w/v）的疊氮化鈉，-80 度凍存寄送。

注意事項：

1）動物1 小時尿量不夠，可分多次收集，如果需要收取24h 尿液，請使用帶有低

溫裝置的代謝籠收取，并添加疊氮化鈉。

2）疊氮化鈉的作用是防腐殺菌，有毒，請萬分小心。

代謝組組織樣本取樣

動物組織

1. 首先準備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管，并且用油性記號筆在鋁箔或凍存管外表

多處寫明樣本編號；

2. 準確切除所需組織后，立即剔除結締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型。務必將

組織分割成小塊；

3. 在生理鹽水或PBS 中迅速漂洗樣本，以去除血漬和污物；

4. 用鑷子夾住樣本，放入液氮中冷卻樣本；

5. 用準備好的鋁箔或冷凍保存管裝載包裹組織，迅速投入液氮或轉入-80℃冰箱保存樣本；

6. 填寫樣本登記單，寫明樣本名稱、組織類型、編號、取樣日期、樣本處理過程等情況。

動物組織的量為 200mg/sample，保留備份，干冰低溫寄送，避免反復凍融。

臨床標本

1. 首先準備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管，并且用油性記號筆在鋁箔或凍存管外表

多處寫明樣本編號；

2. 準確切除所需組織后，并將組織切割成小塊，用鑷子夾住樣本，立即投入液氮冷凍；

3. 用準備好的鋁箔或冷凍保存管裝載包裹組織，迅速投入液氮或轉入-80℃冰箱保存樣本；

4. 填寫樣本登記單，寫明樣本名稱、組織類型、編號、取樣日期、樣本處理過

程等情況。

臨床組織的量為 200mg/sample，保留備份，干冰低溫寄送，避免反復凍融。

植物組織

1. 準確取得所需組織后，用錫箔紙包裹，或放入進口凍存管中，擰緊管蓋。錫箔紙或凍存

管要事先做好標記；

2. 立即投入液氮冷凍，然后于液氮中存放或轉入-80℃超低溫冰箱保存；

3. 填寫樣本登記單，寫明樣本名稱、組織類型、編號、取樣日期、樣本處理過程等情況。

基因芯片，蛋白質(zhì)組學植物組織的量為2g/sample，代謝組學植物組織的量為200mg/sample，

保留備份，干冰低溫寄送，避免反復凍融。

微生物代謝組學樣本收集參考步驟

1. 酵母菌，真菌，細菌

菌體數(shù)量：1*108（一般OD600≈0.6 時，細菌處于生長指數(shù)其，濃度為108cells/ml。）為一

次實驗的用量，**給2 次實驗的用量。

詳細取樣步驟：

1）淬滅：培養(yǎng)好的菌液混勻后，取出1ml 菌液到10ml 離心管中，然后迅速加入預冷的淬

滅試劑60%甘油鹽溶液（-23℃）4ml（-23℃預冷，甘油-鹽溶液，3:2（v/v），如：向1.35%

的 NaCl 溶液200ml 中加入甘油300ml）。迅速渦旋混勻（vortex,2s），然后放入-20℃冰箱

冷凍（約5min）；

2）離心：將淬滅好的菌液進行離心，12000g，20min，-20℃；

3）漂洗：離心處理完畢后，去除上清，加入2ml 漂洗液（-20℃預冷，甘油-鹽溶液，1:1（v/v）

如：向1.35%的 NaCl 溶液（200ml）中加入甘油（200ml）），渦旋混勻，離心，去除上清，

條件同上；

4）將沉淀（菌體）進行凍干處理；

5）凍存到-80℃冰箱內(nèi)，干冰寄送到我公司。

2. 革蘭氏陰性及革蘭氏陽性菌（如枯草芽孢桿菌，大腸桿菌等）

菌體數(shù)量：1*108 為一次實驗的用量，**給2 次實驗的用量。

詳細取樣步驟：

1） 淬滅：70%冷甲醇（-70℃）

2） 快速過濾

3） 凍干，-80℃凍存

4） 低溫寄送

3. 酵母（Yeast）

菌體數(shù)量：1*108 為一次實驗的用量，**給2 次實驗的用量。

詳細取樣步驟：

1） 淬滅：60%冷甲醇（-40℃）

2） 快速過濾

3） 凍干，-80℃凍存

4） 低溫寄送

4. 木霉菌

菌體數(shù)量：1*108 為一次實驗的用量，**給2 次實驗的用量。

詳細取樣步驟：

1） 淬滅：20%冷甘油（-70℃）

2） 快速過濾

3） 凍干，凍存

4） 低溫寄送

蛋白芯片樣本相關

* 哪些類型的樣本可用于抗體芯片檢測？

　細胞裂解物、組織提取物以及血清樣本都可用于抗體芯片檢測分析。

* 抗體芯片檢測是否需要設定對照？

　我們推薦使用抗體芯片檢測時同時檢測對照樣本，包括空白對照、造模對照、陽性對照等。

* 抗體芯片檢測過程中需要的最低蛋白量為多少？

　抗體芯片檢測過程中蛋白質(zhì)需要經(jīng)過標記與檢測兩個步驟，需要的最低蛋白量為總蛋白40 －100微克。

* 如果使用細胞樣本，獲得100微克總蛋白需要多少細胞？

　由于細胞類型不同，每個細胞的蛋白含量也不盡相同。我們通常實驗中使用 106 － 107 的細胞可提取大約 1 毫克蛋白質(zhì)，其中大約 100ug 用來進行標記與雜交，因此我們推薦提供 5 × 106 細胞用于抗體芯片檢測。

* 準備芯片檢測樣品前要注意什么？

　答：樣品盡量新鮮，組織樣本冷凍前盡量去除血液等、血清不要有溶血發(fā)生、樣品不要反復凍融。

* 可以使用除了抗體芯片配套試劑盒中的提取緩沖液以外的蛋白裂解試劑嗎？

　是的，在細胞或者組織裂解獲得蛋白質(zhì)的過程中是可以使用各種緩沖液的（如：RIPA裂解液），但是這些緩沖液不能包含 Tris 。因為 Tris 組分會影響到下一步的蛋白質(zhì)標記步驟。因此，在使用含有 Tris 組分的緩沖液獲得蛋白質(zhì)之后，推薦使用 Millipore, Microcon YM-10 filters (Catalog: 42406) 或者 Sephadex G-25 columns 置換成標記緩沖液體系。

* 在裂解過程中需要加入蛋白酶抑制劑嗎？

　抗體芯片的配套裂解試劑中是不含蛋白酶抑制劑的。樣本取來后，會在低溫快速的情況下完成蛋白質(zhì)提取、標記以及雜交過程。如果您需要自己裂解樣本，那么推薦您在蛋白質(zhì)裂解過 程中加入蛋白酶抑制劑。